{rfName}
In

Indexat a

Llicència i ús

Icono OpenAccess

Altmetrics

Impacte en els Objectius de Desenvolupament Sostenible (ODS)

Anàlisi d'autories institucional

Frances-Soriano, LauraAutor o coautor

Compartir

7 d’agost de 2025
Publicacions
>
Article

In Situ Rolling Circle Amplification Forster Resonance Energy Transfer (RCA-FRET) for Washing-Free Real-Time Single-Protein Imaging

Publicat a: Analytical Chemistry. 93 (3): 1842-1850 - 2021-01-26 93(3), DOI: 10.1021/acs.analchem.0c04828

Autors:

Frances-Soriano, Laura; Leino, Mattias; Dos Santos, Marcelina Cardoso; Kovacs, Daniel; Borbas, K Eszter; Soderberg, Ola; Hildebrandt, Niko
[+]

Afiliacions

Univ Paris Saclay, Inst Integrat Biol Cell I2BC, CEA, CNRS, F-91405 Orsay, France - Autor o coautor
Univ Rouen Normandie, Lab COBRA Chim Organ Bioorgan Reactivite & Anal, INSA, CNRS,NanoFRET Com, F-76821 Mont St Aignan, France - Autor o coautor
Uppsala Univ, Dept Chem, Angstrom Lab, S-75120 Uppsala, Sweden - Autor o coautor
Uppsala Univ, Dept Pharmaceut Biosci, S-75124 Uppsala, Sweden - Autor o coautor
Veure més

Resum

Fluorescence signal enhancement via isothermal nucleic acid amplification is an important approach for sensitive imaging of intra- or extracellular nucleic acid or protein biomarkers. Rolling circle amplification (RCA) is frequently applied for fluorescence in situ imaging but faces limitations concerning multiplexing, dynamic range, and the required multiple washing steps before imaging. Here, we show that Forster resonance energy transfer (FRET) between fluorescent dyes and between lanthanide (Ln) complexes and dyes that hybridize to beta-actin-specific RCA products in HaCaT cells can afford washing-free imaging of single beta-actin proteins. Proximity-dependent FRET could be monitored directly after or during (real-time monitoring) dye or Ln DNA probe incubation and could efficiently distinguish between photoluminescence from beta-actin-specific RCA and DNA probes freely diffusing in solution or nonspecifically attached to cells. Moreover, time-gated FRET imaging with the Ln-dye FRET pairs efficiently suppressed sample autofluorescence and improved the signal-to-background ratio. Our results present an important proof of concept of RCA-FRET imaging with a strong potential to advance in situ RCA toward easier sample preparation, higher-order multiplexing, autofluorescence-free detection, and increased dynamic range by real-time monitoring of in situ RCA.
[+]

Paraules clau

Affordable and clean energyAutofluorescenceCell lineComplexesDiagnostic assayDnDna probesFluorescence resonance energy transferFluorescent dyesHumansMicrornaNucleic acid amplification techniquesPlatformProteinsReductionTime factors

Indicis de qualitat

Impacte bibliomètric. Anàlisi de la contribució i canal de difusió

El treball ha estat publicat a la revista ANALYTICAL CHEMISTRY a causa de la seva progressió i el bon impacte que ha aconseguit en els últims anys, segons l'agència WoS (JCR), s'ha convertit en una referència en el seu camp. A l'any de publicació del treball, 2021, es trobava a la posició 7/87, aconseguint així situar-se com a revista Q1 (Primer Cuartil), en la categoria Chemistry, Analytical. Destacable, igualment, el fet que la revista està posicionada per sobre del Percentil 90.

Des d'una perspectiva relativa, i tenint en compte l'indicador de impacte normalitzat calculat a partir de les Citacions Mundials proporcionades per WoS (ESI, Clarivate), proporciona un valor per a la normalització de citacions relatives a la taxa de citació esperada de: 1.66. Això indica que, comparat amb treballs en la mateixa disciplina i en el mateix any de publicació, el situa com un treball citat per sobre de la mitjana. (font consultada: ESI 13 Nov 2025)

Aquesta informació es reforça amb altres indicadors del mateix tipus, que encara que dinàmics en el temps i dependents del conjunt de citacions mitjanes mundials en el moment del seu càlcul, coincideixen a posicionar en algun moment el treball, entre el 50% més citats dins de la seva temàtica:

  • Mitjana Ponderada de l'Impacte Normalitzat de l'agència Scopus: 1.44 (font consultada: FECYT Mar 2025)

Concretament, i atenent a les diferents agències d'indexació, aquest treball ha acumulat, fins a la data 2026-04-06, el següent nombre de cites:

  • WoS: 25
  • Scopus: 26
  • Europe PMC: 15
[+]

Impacte i visibilitat social

Des de la dimensió d'influència o adopció social, i prenent com a base les mètriques associades a les mencions i interaccions proporcionades per agències especialitzades en el càlcul de les denominades "Mètriques Alternatives o Socials", podem destacar a data 2026-04-06:

  • L'ús, des de l'àmbit acadèmic evidenciat per l'indicador de l'agència Altmetric referit com a agregacions realitzades pel gestor bibliogràfic personal Mendeley, ens dona un total de: 20.
  • L'ús d'aquesta aportació en marcadors, bifurcacions de codi, afegits a llistes de favorits per a una lectura recurrent, així com visualitzacions generals, indica que algú està fent servir la publicació com a base del seu treball actual. Això pot ser un indicador destacat de futures cites més formals i acadèmiques. Aquesta afirmació està avalada pel resultat de l'indicador "Capture", que aporta un total de: 20 (PlumX).

Amb una intenció més de divulgació i orientada a audiències més generals, podem observar altres puntuacions més globals com:

  • El Puntuació total de Altmetric: 3.

És fonamental presentar evidències que recolzin l'alineació plena amb els principis i directrius institucionals sobre Ciència Oberta i la Conservació i Difusió del Patrimoni Intel·lectual. Un clar exemple d'això és:

  • El treball s'ha enviat a una revista la política editorial de la qual permet la publicació en obert Open Access.
Seguint amb l'impacte social del treball, és important destacar el fet que, pel seu contingut, pot ser assignat a la línia d'interès de ODS 7 - Affordable and clean energy, amb una probabilitat del 87% segons l'algoritme mBERT desenvolupat per Aurora University.
[+]

Anàlisi del lideratge dels autors institucionals

Aquest treball s'ha realitzat amb col·laboració internacional, concretament amb investigadors de: France; Sweden.

Hi ha un lideratge significatiu, ja que alguns dels autors pertanyents a la institució apareixen com a primer o últim signant, es pot apreciar en el detall: Primer Autor (Francés Soriano, Laura) .

[+]

Objectius del projecte

La aportación persigue los siguientes objetivos: analizar la aplicación de la amplificación en círculo rodante (RCA) combinada con transferencia de energía por resonancia de Förster (FRET) para la imagen en tiempo real de proteínas individuales sin necesidad de lavados; evaluar la capacidad de FRET para distinguir señales específicas de beta-actina en células HaCaT frente a señales no específicas; caracterizar la eficiencia de la imagen FRET con pares Ln-dye para suprimir la autofluorescencia y mejorar la relación señal-ruido; determinar el potencial de esta técnica para facilitar la preparación de muestras, aumentar la multiplexación y ampliar el rango dinámico mediante el monitoreo en tiempo real; y demostrar un concepto innovador que avance la imagen in situ basada en RCA hacia aplicaciones más sensibles y específicas.
[+]

Resultats més rellevants

El estudio presenta avances significativos en la amplificación isotérmica in situ para la imagen de proteínas individuales mediante RCA-FRET. Se logró la detección sin lavado de proteínas beta-actina específicas en células HaCaT mediante transferencia de energía por resonancia de Förster (FRET) entre tintes fluorescentes y complejos de lantánidos. Se demostró la monitorización en tiempo real de FRET durante la incubación de sondas, permitiendo distinguir eficazmente la fotoluminiscencia específica de RCA de señales no específicas. La imagen con FRET temporizado suprimió eficazmente la autofluorescencia, mejorando la relación señal-ruido. Estos resultados evidencian un avance hacia una preparación de muestras más sencilla, mayor multiplexación, detección libre de autofluorescencia y un rango dinámico ampliado.
[+]

Reconeixements vinculats a l’ítem

We thank Lumiphore, Inc. for gifting Lumi4 reagents. This work was partially funded by the European Commission (Marie Sklodowska-Curie Actions, Individual Fellowship of Laura Frances-Soriano), the French National Research Agency (ANR projects "PhenX" and "Neutrinos" and Labex "SynOrg"), the Region Normandie (Chaire d'Excellence "COBRA-FRET"), the Institut Universitaire de France (IUF), the Swedish Research Council, and the Swedish Cancer Foundation.
[+]