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Impacto en los Objetivos de Desarrollo Sostenible (ODS)

Investigadores/as Institucionales

Frances-Soriano, LauraAutor o Coautor

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7 de agosto de 2025
Publicaciones
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Artículo

In Situ Rolling Circle Amplification Forster Resonance Energy Transfer (RCA-FRET) for Washing-Free Real-Time Single-Protein Imaging

Publicado en: Analytical Chemistry. 93 (3): 1842-1850 - 2021-01-26 93(3), DOI: 10.1021/acs.analchem.0c04828

Autores:

Frances-Soriano, Laura; Leino, Mattias; Dos Santos, Marcelina Cardoso; Kovacs, Daniel; Borbas, K Eszter; Soderberg, Ola; Hildebrandt, Niko
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Afiliaciones

Univ Paris Saclay, Inst Integrat Biol Cell I2BC, CEA, CNRS, F-91405 Orsay, France - Autor o Coautor
Univ Rouen Normandie, Lab COBRA Chim Organ Bioorgan Reactivite & Anal, INSA, CNRS,NanoFRET Com, F-76821 Mont St Aignan, France - Autor o Coautor
Uppsala Univ, Dept Chem, Angstrom Lab, S-75120 Uppsala, Sweden - Autor o Coautor
Uppsala Univ, Dept Pharmaceut Biosci, S-75124 Uppsala, Sweden - Autor o Coautor
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Resumen

Fluorescence signal enhancement via isothermal nucleic acid amplification is an important approach for sensitive imaging of intra- or extracellular nucleic acid or protein biomarkers. Rolling circle amplification (RCA) is frequently applied for fluorescence in situ imaging but faces limitations concerning multiplexing, dynamic range, and the required multiple washing steps before imaging. Here, we show that Forster resonance energy transfer (FRET) between fluorescent dyes and between lanthanide (Ln) complexes and dyes that hybridize to beta-actin-specific RCA products in HaCaT cells can afford washing-free imaging of single beta-actin proteins. Proximity-dependent FRET could be monitored directly after or during (real-time monitoring) dye or Ln DNA probe incubation and could efficiently distinguish between photoluminescence from beta-actin-specific RCA and DNA probes freely diffusing in solution or nonspecifically attached to cells. Moreover, time-gated FRET imaging with the Ln-dye FRET pairs efficiently suppressed sample autofluorescence and improved the signal-to-background ratio. Our results present an important proof of concept of RCA-FRET imaging with a strong potential to advance in situ RCA toward easier sample preparation, higher-order multiplexing, autofluorescence-free detection, and increased dynamic range by real-time monitoring of in situ RCA.
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Palabras clave

Affordable and clean energyAutofluorescenceCell lineComplexesDiagnostic assayDnDna probesFluorescence resonance energy transferFluorescent dyesHumansMicrornaNucleic acid amplification techniquesPlatformProteinsReductionTime factors

Indicios de calidad

Impacto bibliométrico. Análisis de la aportación y canal de difusión

El trabajo ha sido publicado en la revista ANALYTICAL CHEMISTRY debido a la progresión y el buen impacto que ha alcanzado en los últimos años, según la agencia WoS (JCR), se ha convertido en una referencia en su campo. En el año de publicación del trabajo, 2021, se encontraba en la posición 7/87, consiguiendo con ello situarse como revista Q1 (Primer Cuartil), en la categoría Chemistry, Analytical. Destacable, igualmente, el hecho de que la Revista está posicionada por encima del Percentil 90.

Desde una perspectiva relativa, y atendiendo al indicador del impacto normalizado calculado a partir de las Citas Mundiales proporcionadas por WoS (ESI, Clarivate), arroja un valor para la normalización de citas relativas a la tasa de citación esperada de: 1.66. Esto indica que, de manera comparada con trabajos en la misma disciplina y en el mismo año de publicación, lo ubica como trabajo citado por encima de la media. (fuente consultada: ESI 13 Nov 2025)

Esta información viene reforzada por otros indicadores del mismo tipo, que aunque dinámicos en el tiempo y dependientes del conjunto de citaciones medias mundiales en el momento de su cálculo, coinciden en posicionar en algún momento al trabajo, entre el 50% más citados dentro de su temática:

  • Media Ponderada del Impacto Normalizado de la agencia Scopus: 1.44 (fuente consultada: FECYT Mar 2025)

De manera concreta y atendiendo a las diferentes agencias de indexación, el trabajo ha acumulado, hasta la fecha 2026-04-06, el siguiente número de citas:

  • WoS: 25
  • Scopus: 26
  • Europe PMC: 15
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Impacto y visibilidad social

Desde la dimensión de Influencia o adopción social, y tomando como base las métricas asociadas a las menciones e interacciones proporcionadas por agencias especializadas en el cálculo de las denominadas “Métricas Alternativas o Sociales”, podemos destacar a fecha 2026-04-06:

  • El uso, desde el ámbito académico evidenciado por el indicador de la agencia Altmetric referido como agregaciones realizadas por el gestor bibliográfico personal Mendeley, nos da un total de: 20.
  • La utilización de esta aportación en marcadores, bifurcaciones de código, añadidos a listas de favoritos para una lectura recurrente, así como visualizaciones generales, indica que alguien está usando la publicación como base de su trabajo actual. Esto puede ser un indicador destacado de futuras citas más formales y académicas. Tal afirmación es avalada por el resultado del indicador “Capture” que arroja un total de: 20 (PlumX).

Con una intencionalidad más de divulgación y orientada a audiencias más generales podemos observar otras puntuaciones más globales como:

  • El Score total de Altmetric: 3.

Es fundamental presentar evidencias que respalden la plena alineación con los principios y directrices institucionales en torno a la Ciencia Abierta y la Conservación y Difusión del Patrimonio Intelectual. Un claro ejemplo de ello es:

  • El trabajo se ha enviado a una revista cuya política editorial permite la publicación en abierto Open Access.
Siguiendo con el impacto social del trabajo, es importante enfatizar el hecho de que, por su contenido, puede ser asignado a la línea de interés del ODS 7 - Garantizar el acceso a una energía asequible, segura, sostenible y moderna, con una probabilidad del 87% según el algoritmo mBERT desarrollado por Aurora University.
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Análisis de liderazgo de los autores institucionales

Este trabajo se ha realizado con colaboración internacional, concretamente con investigadores de: France; Sweden.

Existe un liderazgo significativo ya que algunos de los autores pertenecientes a la institución aparecen como primer o último firmante, se puede apreciar en el detalle: Primer Autor (Francés Soriano, Laura) .

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Objetivos del proyecto

La aportación persigue los siguientes objetivos: analizar la aplicación de la amplificación en círculo rodante (RCA) combinada con transferencia de energía por resonancia de Förster (FRET) para la imagen en tiempo real de proteínas individuales sin necesidad de lavados; evaluar la capacidad de FRET para distinguir señales específicas de beta-actina en células HaCaT frente a señales no específicas; caracterizar la eficiencia de la imagen FRET con pares Ln-dye para suprimir la autofluorescencia y mejorar la relación señal-ruido; determinar el potencial de esta técnica para facilitar la preparación de muestras, aumentar la multiplexación y ampliar el rango dinámico mediante el monitoreo en tiempo real; y demostrar un concepto innovador que avance la imagen in situ basada en RCA hacia aplicaciones más sensibles y específicas.
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Resultados más relevantes

El estudio presenta avances significativos en la amplificación isotérmica in situ para la imagen de proteínas individuales mediante RCA-FRET. Se logró la detección sin lavado de proteínas beta-actina específicas en células HaCaT mediante transferencia de energía por resonancia de Förster (FRET) entre tintes fluorescentes y complejos de lantánidos. Se demostró la monitorización en tiempo real de FRET durante la incubación de sondas, permitiendo distinguir eficazmente la fotoluminiscencia específica de RCA de señales no específicas. La imagen con FRET temporizado suprimió eficazmente la autofluorescencia, mejorando la relación señal-ruido. Estos resultados evidencian un avance hacia una preparación de muestras más sencilla, mayor multiplexación, detección libre de autofluorescencia y un rango dinámico ampliado.
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Reconocimientos ligados al ítem

We thank Lumiphore, Inc. for gifting Lumi4 reagents. This work was partially funded by the European Commission (Marie Sklodowska-Curie Actions, Individual Fellowship of Laura Frances-Soriano), the French National Research Agency (ANR projects "PhenX" and "Neutrinos" and Labex "SynOrg"), the Region Normandie (Chaire d'Excellence "COBRA-FRET"), the Institut Universitaire de France (IUF), the Swedish Research Council, and the Swedish Cancer Foundation.
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